Tissue Culture Tips

Weefselkweek is de propagatie van cellen in een vloeibaar groeimedium in het lab verschillende wetenschappelijke doeleinden. Bijvoorbeeld, worden weefselculturen in genetische ziekte wordt, als medium voor het kweken van intracellulaire pathogenen zoals bacteriën of virussen of onderzoek in de cellen zelf. Weefselcultuurcellen

Sommige cellen
zich aan de onderkant van petrischalen of gesuspendeerd in de vloeistof blijft. Cellen kunnen van plantaardige of dierlijke oorsprong. Cellen die in weefselcultures zijn primaire cellen, wat betekent dat ze werden rechtstreeks geoogst van een organisme, of van een cellijn die al in cultuur heeft gehandhaafd. Cellijnen zijn vaak kankercellen, en dit moet worden overwogen bij de planning of de interpretatie van experimenten.
Treat Cellen Gently

Adherente cellen
worden uit hun petrischaal voor passage door verwijderd schrapen of met een protease, algemeen trypsine en EDTA. Scraping doodt vele cellen en mag alleen worden gebruikt bij het opstellen van cellysaten (vloeibare bereidingen van celinhoud voor analyse) of wanneer trypsine /EDTA moet absoluut vermeden worden.

Trypsinizing
verwijdert niet alleen de eiwitten die cellen zich aan het gerecht maar de meeste andere eiwitten op het membraan van de cel, ook. Cellen bal omhoog en neem de tijd, meestal 's nachts, om een ​​band met het gerecht te herstellen. Het toevoegen van een minimale hoeveelheid trypsine - ongeveer 1 ml voor 25cm2 flask - schommelen de kolf gedurende vijf seconden of minder het bekleden van de monolaag en afgieten of opzuigen van de overmaat trypsine zal de hoeveelheid trypsine waarop de monolaag wordt blootgesteld te verminderen. Laat de cellen rusten in de couveuse tijdens behandeling met trypsine.

Nadat de cellen schuif de bodem van de schaal, media toe te voegen met serum en zuig het lysaat op en neer de pipet voorzichtig. Laat een beetje media te blijven in het gerecht als je pipet op en neer meerdere keren om uiteen te vallen bosjes en krijgt een nog schorsing.

Niet bubbels zuigen in de pipet. Ook niet krachtig mix of vortex de celsuspensie;. De cellen zijn erg kwetsbaar in deze gebald-up state
Om Verhit Inactiveer of niet aan Verhit Inactiveer

Wanneer celcultuur technieken waren in de kinderschoenen, werd foetaal bovine serum (FBS) bekend te complement eiwitten, die het immuunsysteem eiwitten die cellen lyseren zijn bevatten. Complementproteïnen niet gewenst in celcultuur. Hitte-geïnactiveerd FBS bij 56 graden Celsius gedurende 30 minuten zal complementeiwitten inactief maken. Voorverwarmen FBS tot 37 graden C is ook genoeg om complement eiwitten inactiveren.

In de vroege dagen, warmte geïnactiveerd FBS doodde ook mycoplasma en andere verontreinigingen. Destijds werd filter sterilisatie uitgevoerd met 0.45um filters. Vandaag hebben we filter steriliseren FBS en media via 0.1um of zelfs 0.04um filters. Geen mycoplasma zal glippen door die

Dit laat ons de vraag wel of niet aan warmte inactiveren

Hitte inactivatie
degradeert alle onderdelen van de FBS -.. Zoals vitamines, aminozuren en groeifactoren -. eventueel onder de drempel voor sommige pietluttige cellijnen

Als u werkt met een langzaam groeiende of pietluttige cellijn, overwegen alleen filteren steriliseren uw FBS. Misschien vindt u dit verhoogt de robuustheid van je cellen.