Plaque Assay Method

Een assay is een techniek voor het isoleren en zuiveren virussen en virale titers (de laagste concentratie van het virus die resulteert in infectie) bepalen. A plaque assay, oorspronkelijk genoemd virologisch assay werd ontwikkeld om de infectiviteit van bacteriofagen meten en tellen. Volgens Biology-Online.org, was later ook toegepast zoogdierlijke virussen tellen. De feiten

Een plaquette is een confluente, monolaagcultuur van cellen. Vormt als gevolg van infectie van een van de cellen door een virusdeeltje volgens Biology-Online.org. Zodra de cel is geïnfecteerd, het virus repliceert en uiteindelijk de cel doodt. Bovendien, de nieuw gerepliceerde virusdeeltjes verspreiden, infecteren en doden van de nabijgelegen cellen.
Functie

In een plaque assay, de cultuur is eerst gekleurd met een bepaalde kleurstof. Dit sterven vlekken enige haalbare (levende) cellen, volgens Biologie-Online.org. Daardoor verschijnen de dode cellen onbesmet in de kweek tegen de gekleurde achtergrond. Momenteel wordt de plaque assay toegepast op cellen die antilichamen die erytrocyten vernietigen door hemolyse produceren detecteren.
Eigenschappen

erytrocyten
zijn cellen (ook wel rode bloedcellen ) die bevatten hemoglobine en transport van zuurstof en koolstofdioxide in het bloed van de longen en weefsels. Hemolyse optreedt wanneer erytrocyten open te breken en het vrijkomen hemoglobine, volgens Biologie-Online.org. Bijgevolg, in de plaque assay, de basis duidelijk plaque en geeft aan dat de rode bloedcellen werden gehemolyseerd door de antilichamen.
Method Deel I

Ten -voudige verdunningen van een virus voorraad zijn voorbereid vóór het uitvoeren van een plaque assay en 0,1 ml aliquiots zijn op te maken aan de celmonolagen. Dit mengsel wordt gedurende een tijdsperiode, zodat het virus tijd om de cellen aan te vallen. Verder worden de monolagen met een voedingsmedium dat een stof (gewoonlijk agar) bevat, volgens "Detectie Virussen: A Plaque Assay" door Vincent Racaniello. De voedingsbodem vormt een gel en na de kweek wordt geïncubeerd, de oorspronkelijke geïnfecteerde cellen los virale nageslacht. De gel beperken de verspreiding van het virus naar omringende cellen, en daardoor het infectueuze deeltjes produceert een cirkelvormig gebied genaamd plaque. Met de tijd, de plaque groeit om een ​​formaat met het blote oog en pigmenten worden gebruikt om de weergave te verbeteren.
Method Part II

De virus titer wordt berekend plaque vormende eenheden, genaamd PFU per milliliter. Deze worden geteld en geminimaliseerde fout alleen platen die tussen 10 en 100 plaques bevatten geteld. Bovendien, volgens "Opsporen Virussen: Een Plaque Assay," voor elke 100 geteld plaques dezelfde titer zal verschillen per plus of min 10 procent. Daarom is het geschatte foutenpercentage van een plaque assay is ongeveer 10 procent, wanneer correct uitgevoerd.