PCR Basics

Polymerase Chain Reaction (PCR) is een werkwijze voor DNA-replicatie. De werkwijze is vernoemd DNA polymerase, een enzym gebruikt om het proces van DNA-replicatie katalyseren. Kary Mullis ontwikkelde de techniek in 1984 en werd bekroond met de Nobelprijs voor de Scheikunde voor zijn werk in 1993. Toepassingen van PCR

Gemeenschappelijke toepassingen van PCR
omvatten DNA fingerprinting (waarbij DNA-fragmenten worden geïsoleerd en vergeleken met bestaande gegevens), analyse van extreem kleine steekproef bedragen (die wetenschappers in staat stelt om uitgestorven organismen en overleden historische reconstructie cijfers) en de diagnose van de ziekte (met inbegrip van viraal DNA en kankeronderzoek)
PCR Componenten

Benodigde onderdelen en reagentia van een PCR-reactie
zijn:. genomische DNA (de sjabloon repliceren), twee primers (een vooruit en een achteruit) complementair aan de DNA-matrijs-sequentie, een reactiecoctail (waaronder Taq polymerase en een bufferoplossing die een levensvatbare omgeving waarin de reactie optreedt levert) en het substraat voor het enzym Taq . (nucleotiden dat zal helpen "bouwen" van de individuele strengen)
Stappen van PCR

De stappen van de reactie zijn: Denaturatie (tijdens welke temperatuur verhoogd tot de DNA-matrijs strengen scheiden), gloeien van de primer (waarbij de temperatuur wordt afgekoeld ter bevordering vrij zwevende primersequenties houden aan geïsoleerde matrijs strengen DNA) en extensie (waarbij de Taq polymerase zich aan de primer en gebruikt gratis zwevende nucleotiden aan elkaar geïsoleerde DNA matrijsstreng repliceren). Dit proces te herhalen een paar keer zal elke gerepliceerde sequentie te isoleren van de oorspronkelijke DNA-template. Elke herhaling exponentieel verhoogt de hoeveelheid gerepliceerde DNA tot er een voldoende hoeveelheid van de gewenste experiment. Voor optimale temperatuur en andere omstandigheden, zie Yale University's 'Designing PCR Programma's "in Resources, hieronder.
Stadia van PCR

De reactie kan ook in drie fasen worden beschreven : Amplification (waarin DNA wordt exponentieel gerepliceerd); Niveau-Off (waarin de Taq-polymerase-activiteit verliest), en Plateau (op dat moment niet meer product in de huidige reactie kan worden geproduceerd). Voor een interactieve demonstratie van de PCR-reactie, zie Universiteit van Utah's "PCR Virtual Lab 'in Resources, hieronder.