MBP Purification Protocols

MBP of maltose bindend eiwit in de bacterie Escherichia coli, die deel uitmaakt van de darmflora van mensen en dieren. De zuivering van MBP omvat een reeks procedures ter scheiden bestanddelen van de proteïne. In moleculaire biologie, MBP zuivering is een belangrijk proces voor de studie van de structuur en functie van dit eiwit. MBP zuivering protocollen omvatten MBP gefuseerde eiwitten zuivering, kleinschalige MBP-fusie en maltosebindingsproteïne fusie tag zuivering. MBP Fused eiwitten Purification

Tijdens dit protocol, technici wassen 20 ml van het polymeer amylose hars met atris oplossing bij pH 7,4, natriumchloride, Mercaptoethanol (ME) en ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA), volgens protocollen online. Celmonsters worden toegevoegd, gecentrifugeerd en geanalyseerd op gelelektroforese. Monsters ook geanalyseerd in een chromatographer, waarin technici elutie of observeren bestanddelen van de oplossing terwijl het door de kolomchromatografie.
Small Scale MBP-fusie Protein Purification

Volgens de Hebreeuwse Universiteit van Jeruzalem, biologen gebruiken het reagens isopropyl BD-1-thiogalactopyranoside (IPTG), draai celcultuur gedurende 10 minuten bij 8000 omwentelingen per minuut bij 39,2 graden Fahrenheit. Later, verwijderen ze bovenstaande vloeistof en meng koude PBS buffer aan het monster, die is onderverdeeld in verscheidene buizen en opnieuw gecentrifugeerd. Monsters worden vervolgens bewaard bij -112 graden Fahrenheit voor posterior analyse.
Maltosebindingsproteïne Fusion Tag Purification

Affiniteitslabels
zijn genetisch gemanipuleerde moleculen werkzaam in de moleculaire biologie om eiwitten te detecteren en te zuiveren. Dit protocol is een complexe reeks procedures verdeeld in drie fasen, waarbij de constructie van polyhistidine eiwitmerker (HisMBP) omvatten: een proefproject om de oplosbaarheid van het eiwit te evalueren, en de grootschalige zuivering van MBP moleculen volgens Nature Protocols . Naast E.coli samples, technici ampicilline, kanamycine, IPTG, anhydrotetracycline, glucose monohydraat, cellysis buffer, DNA-polymerase, PCR primers, Tris-acetaat-EDTA en ethidium bromide.