Intracellulaire kleuring protocol voor flowcytometrie

Flow cytometrie is een tool die nuttig zijn bij de studie van de cel eiwitten is . Het maakt gebruik van de lichtemissie of fluorescentie van de eiwitten in de cel . Antilichamen of probes gelabeld met fluorescentie worden gebruikt om specifieke eiwitten te bestuderen . Flowcytometrie wordt gebruikt om een ​​aantal ziekten , waaronder kanker diagnose , maar is ook nuttig bij medisch onderzoek . Vaststelling Cellen

cellen
moeten worden vastgesteld om de stabiliteit van de intracellulaire eiwitten behouden . Een aantal fixatieven kunnen worden gebruikt, zoals formaldehyde of ijskoude aceton . Na fixatie , het celmembraan moet permealized zodat het antilichaam aan de cel . Detergentia zoals Triton of NP - 40 of ijskoude methanol kan worden gebruikt om gaten in de celmembraan .
Staining

Wash cellen appartementen in de blockingbuffer 0,5 procent runderserumalbumine verdund in fosfaat gebufferde zoutoplossing , BSA /PBS . Cellen worden geïncubeerd in het blokkeren van buffer om niet-specifieke binding te verminderen . Voeg primair antilichaam verdund in blokkerende buffer en laat incuberen bij kamertemperatuur , voor optimale tijdsduur . Wassen met blokkerende buffer .
Analyse

Incubeer het secundaire antilichaam , dat is gelabeld met een fluorescerend label , bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten . Om ongebonden antilichaam wassen cellen te verwijderen in het blokkeren van buffer . Spin cellen in een pellet en vervolgens opnieuw in suspensie in PBS en geanalyseerd op flowcytometer .