Hoe maak je een Beperking Kaart

In de vroege dagen van de moleculaire biologie, de wetenschappers vaak gebruikt restrictiemapping om de genen die ze bestudeerden begrijpen. In de moderne onderzoekslaboratoria, wordt restrictiemapping grotendeels achterhaald omdat sequencing grotere schaal beschikbaar en zuiniger dan in het verleden is geworden. Er zijn echter gevallen waarin een restrictiekaart voldoende voor een onderzoeker haar onderzoek te doen zijn. De algemene aanpak restrictiekaart is het gebruik van spijsverteringsenzymen breken fysiek een DNA-monster. Zodra u de producten van dit spijsvertering te meten, kunt u "monteren" de stukken en af ​​te leiden van de oorspronkelijke volgorde van de DNA. Wat je nodig hebt
Restrictie-enzymen
Sample DNA
Buffer oplossing
ijs en warm waterbad
Gelelektroforese apparatuur
Toon Meer Aanwijzingen
DNA spijsvertering

1

Voeg een restrictie-enzym om uw DNA-monster. Gebruik EcoR1, een algemeen gebruikte enzym, bijvoorbeeld. Kopen van 2

Voeg dit mengsel aan een bufferoplossing, dat in wezen een plaats voor de reactie optreden.
3

Verhoog de temperatuur van de reactie, zoals aangegeven in de New England BioLabs manual. Elk restrictie-enzym een ​​specifieke reactie temperatuur waarbij het best functioneert. Bovendien, elk enzym heeft een specifieke nucleotide sequentie wordt ontworpen te richten. EcoRI zal scannen en snijd het DNA op de nucleotide sequentie CAATTC. Deze exacte volgorde van de nucleotiden moet bestaan ​​voor het enzym te binden en snijd het DNA. Tot op dit punt, moeten alle materialen worden bewaard op ijs om ongewenste activiteiten te voorkomen.
4

Nadat men de reactie optreden, zoals aangegeven in de handleiding, lopen het mengsel in een gel-elektroforese machine om het DNA te scheiden fragmenten op basis van grootte. De kleinste fragmenten zal de verste bewegen over de gel.

Maatregel 5 de afstand afgelegd door elk DNA-fragment. Deze vijf stappen moeten worden herhaald met meerdere verschillende enzymen afzonderlijk.
Constructing de Restriction Map
6

Met behulp van de gegevens die zijn verkregen uit de gel, het verzamelen van alle informatie die je hebt gevonden gebruik van de verschillende restrictie-enzymen.
7

Leid de volgorde van de restrictieplaatsen door vergelijking van de verschillende lengten fragment door elk enzym. Als bijvoorbeeld enzym # 1 produceerde twee fragmenten van # 2 produceerde drie fragmenten van gelijke lengte gelijke lengte en enzym kan concluderen dat enzym # 1 snijdt halverwege het DNA en enzymen nr.2 snijdt het DNA in derden.

8

Met behulp van de conclusies in stap 2, assembleren de volgorde van de restrictie sites voor het DNA.