Hoe doe ik Line Up DNA voor analyse?

Agarosegelelektroforese is de meest voorkomende methode van visuele DNA-fragment-analyse, waarmee technici om visueel te onderscheiden DNA-fragmenten op basis van grootte. De agarose gel onderhoudt een magnetisch veld en aangezien DNA negatieve ladingen, beweegt naar het positieve einde van het magnetisch veld. Kleinere DNA-fragmenten bewegen sneller door de gel en grotere fragmenten bewegen langzamer. DNA-fragmenten worden gekleurd met een fluorescent intercalatiemiddel genoemd ethidium bromide. Dit maakt vergelijking van verschillende elektroforese DNA monsters op een gel. Wat je nodig hebt
Agarosegel, 0,7 procent tot 2 procent
Tris-boraat-EDTA (TBA), tris-acetaat-EDTA (TAE), natrium lithiumacetaat (LA), boorzuur (SB) buffer
Ethidiumbromide
Gel laadkleurstof
gelschaaltje
elektroforese kamer
Handschoenen
beschermende eye wear
Pipette
Electroforese kam
Laat meer instructies
Het voorbereiden van een 0,7 Procent agarosegel
1

Weeg 0,7 gram agarose poeder en vervolgens plaats in een grote (250 ml) erlenmeyer. kopen van 2

Voeg 100ml van een 1X (normale sterkte) buffer (TAE, TBE, SB of LB buffer) aan de Erlenmeyer met de agarose poeder.
3

Magnetron of warmte met behulp van een bunsenbrander voor ongeveer een minuten totdat de oplossing helder en de agarose is opgelost.
4

Neem de kolf van de warmtebron en laat het afkoelen tot 55 tot 60 graden Celsius.
5

Voeg 1 ul (microliter) van ethidiumbromide aan de gekoelde oplossing agarose met een juiste grootte pipet, gewoonlijk 1 ml. Swirl de oplossing te mengen.
6

Giet de gel langzaam in de gel lade zodat er geen belvorming tijdens dit proces. Als er geen geleverde goed dammen met de gel lade, gebruik plakband om ze te vormen.

Plaats 7 een elektroforese kam voorzichtig in de gel, zorgen voor een stevige positie en in de juiste richting. Elektroforese kammen kan sterk verschillen van het aantal tanden ze. Laat de gel voor ongeveer 25 minuten

Dompel 8 de gel in dezelfde buffer gebruikt om de oplossing te bereiden agaorse. - In dit geval een 1X buffer. Dompel de gel in maximaal 5 ml loopbuffer.
Voorbereiding en laden van DNA in de agarosegel voor Analysis

Transfer 05-10 september pi van uw monster (s) van hun reactie buizen naar verse buizen. In het geval dat u wilt het hele reactiemengsel te gebruiken, een nieuwe buis is niet nodig.
10

Voeg 0,2 x laadbuffer aan elk van uw verse monster buisjes met uw DNA-monster te laden.

11

Verwijder de elektroforese kam langzaam, ervoor te zorgen dat u niet de gel te breken of maak elke ruimte tussen de onderkant van de gel en de gel lade.
12

Toevoegen vijf aan 12 ul van een geschikte DNA-merker aan het eerste putje door de elektroforese kam. Of een DNA-merker is geschikt is, hangt af van de grootte van de fragmenten die u verwacht van uw monster.

Load 13 vijf tot 10 ul van uw monsters in de resterende putten en voeg een gelijke bedrag van dezelfde DNA-merker in de finale ook.

Plaats 14 van de elektroden in de elektroforese kamer door het inpluggen van de draden in de juiste aansluitingen in de kamer en zet de elektrode op 50 tot 150 V.

15

Laat de gel een looptijd van een tot vier uur.
Analyse van de Resultaten
16

Verwijder de gel uit de gel kamer en plaats het ofwel in een UV ruimte voor visuele identificatie, of plaats in een machine die in staat is om een ​​foto van de gel te nemen.

Maatregel 17 van de markers afstand van de migratie in hun putten.

Plot 18 de afstanden ten opzichte van de grootte van de banden op semilog grafiek papier en teken een best passende lijn.
19

Bereken de afstanden van uw onbekende bands.

20

Schat de maten van uw onbekende bands door het tekenen van een line-up van de afstand die je onbekende bands die de lijn van de beste pasvorm voldoet.
21

Trek een andere lijn van deze ontmoetingsplek over naar de grootte as.