Cell Freezing Protocol

Behoud cellen door bevriezing essentieel voor onderzoek, diergeneeskunde en dieren omdat het mogelijk maakt cellen worden opgeslagen voor langere tijd. De bevriezingswerkwijze geselecteerd moet echter beperken of beschadiging van de cel voorkomen. De cryopreservatie middel en methode kan afhankelijk van het celtype. Voorbereiding

Cellen
bevroren dienen te worden als ze gezond en actief groeiende met een 90 procent levensvatbaarheid. Zorg moet worden genomen over de behandeling en de hoge snelheid centrifugeren en krachtig pipetteren of uitzuigen moet worden vermeden om de levensvatbaarheid te behouden en voorkomen celbeschadiging.
Cryoprotection

Een cryoprotection agent gebruikt als vervanging voor intracellulair water. Het middel voorkomt ijskristallen en dehydratie in de cellen. Gesteriliseerd glycerol en dimethylsulfoxide gesteriliseerd worden vaak gebruikt in een concentratie van 5 procent tot 15 procent (volume per volume) verdund in hetzij foetaal kalfsserum of kweekmedium, afhankelijk van het celtype.
Freezing en opslag

Cellen
in het ijskoude mengsel moet langzaam worden gekoeld. Als een programmeerbare vriezer beschikbaar is, kan cryovials verpakt in weefsel of geplaatst in polystyreen, waarbij het invriezen kan vertragen. De cellen moeten bij min 80 graden Celsius gedurende 24 uur worden bewaard en vervolgens overgebracht naar vloeibare stikstof voor langdurige opslag.
Ontdooien

Bevroren cellen
moet snel worden ontdooid. Een waterbad bij 37 ° C worden gebruikt. Zorg moet worden genomen met cellen in vloeibare stikstof opgeslagen, echter, zoals vloeibare stikstof kan de flesjes in te voeren en kan ontploffen bij ontdooien. De bevriezing mengsel worden verdund in kweekmedia. Levensvatbaarheid van de cellen moeten worden beoordeeld met de kleurstof trypaanblauw en de cellen gekweekt als normaal.