Cel - gebaseerde ELISA protocol

ELISA of enzyme - linked immunosorbent assay wordt gebruikt als een diagnostisch hulpmiddel in de geneeskunde en in biologisch onderzoek om de hoeveelheid van een specifiek eiwit te kwantificeren . ELISA gebruikt antilichamen tegen het eiwit van belang en een reagens dat een kleur produceert detecteren . De hoeveelheid kleur betreft de hoeveelheid eiwit . Celkweek Cellen

worden geplaatst in de putjes van een 96 - putjesplaat met 100 micro - liter groeimedium en de cellen gedurende de nacht regelen . Als u de cellen ' reactie op een factor studeren bent , moet cellen serum - uitgehongerde voor 24 uur en vervolgens gestimuleerd met de factor onder studie .
Fixatie en primair antilichaam

Na verwijdering van het medium , worden de cellen behandeld met een fixeermiddel zoals 3 percent formaldehyde of methanol . Het celmembraan moet permeabel zodat het antilichaam aan de cel binnendringen. Permeabilisatie kan worden bereikt door het gebruik van 0,1 procent Triton , indien methanol is niet eerder gebruikt . Niet-specifieke binding kan worden voorkomen door het gebruik van 10 procent foetaal kalf serum verdund in fosfaat - gebufferde zoutoplossing . Na verwijdering van het blok , kan het primaire antilichaam worden toegepast en gedurende een uur .
Secundair antilichaam en Stain

Verwijder het primaire antilichaam , en was drie keer . Een secundaire antilichaam gekoppeld aan een detectiemiddel , zoals mierikswortelperoxidase . Incubeer gedurende een uur . Wash toevoegen chemiluminescente substraatoplossing . Ontwikkelen en scan de plaat voor kleurintensiteit .