In de vroege dagen van de moleculaire biologie , de wetenschappers vaak gebruikt beperking mapping naar de genen die ze bestudeerden begrijpen . In de moderne onderzoekslaboratoria , is restrictiemapping grotendeels achterhaald omdat sequencing grotere schaal beschikbaar en zuiniger dan in het verleden is geworden . Er zijn echter gevallen waarin een restrictiekaart toereikend kan zijn voor een onderzoeker haar onderzoek te doen . De algemene aanpak restrictiemapping omvat het gebruik van spijsverteringsenzymen fysiek af te breken een DNA-monster . Zodra u de producten van deze vertering te meten , kunt u " weer in elkaar " de stukken en af te leiden van de oorspronkelijke volgorde van het DNA . Wat je
Beperking nodig enzymen
Sample DNA
Buffer oplossing
IJs en warmwaterbad
Gelelektroforese Equipment Toon meer instructies
DNA Spijsvertering

1

Voeg een restrictie-enzym om uw DNA-monster . Gebruik EcoR1 , een algemeen gebruikte enzym , bijvoorbeeld.
2

Voeg dit mengsel aan een bufferoplossing , die in wezen een plaats voor de reactie optreden .
3

Verhoog de temperatuur van de reactie , zoals aangegeven in de New England Biolabs handleiding . Elk restrictie- enzym een ​​specifieke reactie temperatuur waarbij het ​​functioneert best . Bovendien , elk enzym heeft een specifieke nucleotidesequentie wordt bedoeld te richten . EcoRI scant en snijd het DNA op de nucleotide sequentie CAATTC . De exacte volgorde van nucleotiden moet bestaan ​​voor het enzym te binden en snijden het DNA . Tot dit punt , moeten alle materialen worden bewaard op ijs om ongewenste activiteiten te voorkomen .
4

Nadat men de reactie optreden , zoals aangegeven in de handleiding , lopen het mengsel in een gel elektroforese machine om het DNA te scheiden fragmenten op basis van grootte . De kleinste fragmenten zal de verste bewegen over de gel .
5

Meet de afstand afgelegd door elk DNA-fragment . Deze vijf stappen moeten worden herhaald met meerdere verschillende enzymen afzonderlijk .
Bouw van de Restriction Map
6

Met behulp van de gegevens verkregen uit de gel gegevens , het verzamelen van alle informatie die u hebt gevonden gebruik van de verschillende restrictie -enzymen .
7

Leid de volgorde van de restrictieplaatsen door vergelijking van de verschillende lengten fragment door elk enzym . Als bijvoorbeeld enzym # 1 produceerde twee fragmenten van gelijke lengte en enzym nr.2 produceerde drie fragmenten van gelijke lengte , kan concluderen dat enzym # 1 snijdt halverwege het DNA en enzym nr.2 snijdt het DNA in derden .

8

Met behulp van de conclusies in stap 2 , monteren de volgorde van de restrictie sites voor het DNA.