De Hoechst vlekken zijn fluorescerende kleurstoffen gebruikt voor het labelen van DNA en RNA door fluorescentie microscopie en flowcytometrie technieken . Hoechst 33258 en Hoechst 33342 zijn de meest gebruikte van deze vlekken . Zij hebben het vermogen om te binden aan DNA -moleculen , waardoor de kernen en mitochondria verschijnen fluoresceren onder ultraviolet licht . Protocollen voor Hoechst kleuring zijn gangbare praktijk in biotechnologische en genetica laboratoria , en omvatten celkleuring technieken met behulp van zowel Hoechst 33258 en Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC kleuring en Stem Cell Zuivering Protocol

Dit protocol wordt gebruikt om cellen te kleuren van muizen beenmerg. Technici bereiden beenmerg monster met HBSS + zoutoplossing , HEPES buffer en foetaal kalf serum . Ze draaien de oplossing en voeg een voorverwarmde DMEM-medium . Hoechst vlek wordt dan toegevoegd . De oplossing wordt in een 98,6 graden Fahrenheit waterbad gedurende precies 90 minuten , meldt de afdeling Immunologie aan de University of Pittsburgh . DNA-segmenten verschijnen fluorescerend onder een cytometer .
Hoechst 33342 DNA kleuring

Tijdens dit protocol , technici geschorst Hoechst 33342 vlek in gedestilleerd water , voeg 2 procent foetaal kalf serum aan het celmonster , waarbij de pH op 7,2 met behulp van een bufferoplossing . Cellen worden vervolgens geïncubeerd bij 98,6 graden F voor een uur , en onmiddellijk geanalyseerd met een stuk van de apparatuur cytometer genoemd .

Stained DNA is dan zichtbaar en fluorescerende , volgens de Universiteit van Michigan Health System.


DNA- detectie met behulp van de DNA-bindende Fluorochroom Hoechst 33258

Deze protocollen gebruikt een apparaat genaamd spectrofotometer aan DNA en RNA -segmenten te analyseren. Technici gebruiken Hoechst 33258 werkende oplossing en kalf thymus DNA-monsters . Ze een afgescheiden oplossing maken ook gebruik van het DNA monster en een chemische stof ethidiumbromide . Later , zij het ​​celkleuring resultaten te vergelijken in beide media , met behulp van een spectrofotometer , volgens Current Protocols in Cytometry .