Hoewel het mogelijk is om serum te gebruiken om een ​​Western blot uit te voeren, wordt dit over het algemeen niet aanbevolen. Serum is een complex mengsel dat cellen en eiwitten bevat, inclusief cellen die de detectie van specifieke interessante eiwitten kunnen verstoren. Bovendien kan serum een ​​hoog achtergrondsignaal hebben, wat het moeilijk kan maken om eiwitten met een lage overvloed te detecteren. Om deze redenen worden doorgaans gezuiverde eiwitmonsters gebruikt in Western blots.

In bepaalde gevallen kan het echter noodzakelijk of voordelig zijn om serum voor Western-blotting te gebruiken. Als het eiwit van belang bijvoorbeeld in lage hoeveelheden aanwezig is in het gezuiverde eiwitmonster, kan het gebruik van serum de kans vergroten dat het eiwit wordt gedetecteerd. Bovendien kan serum worden gebruikt om eiwit-eiwitinteracties te bestuderen of om antilichamen tegen specifieke eiwitten te detecteren.

Als serum moet worden gebruikt voor Western-blotting, is het belangrijk om stappen te ondernemen om de kans op interferentie en achtergrondsignalen te minimaliseren. Deze stappen kunnen het volgende omvatten:

* Het serummonster voorbereiden door centrifugeren om celresten en onoplosbare deeltjes te verwijderen.

* Verdunnen van het serummonster om de concentratie van storende stoffen te verminderen.

* Het gebruik van een blokkerende stof, zoals runderserumalbumine (BSA), om niet-specifieke interacties te minimaliseren.

* Optimaliseren van de Western-blotting-omstandigheden, zoals de antilichaamconcentraties en incubatietijden, om het achtergrondsignaal te verminderen.

Hoewel het gebruik van serum voor Western-blotting over het algemeen niet wordt aanbevolen vanwege de kans op interferentie en achtergrondsignalen, kan het in bepaalde gevallen in het algemeen noodzakelijk of voordelig zijn. Zorgvuldige optimalisatie van de Western-blotting-omstandigheden is essentieel bij het gebruik van serum.