Methylroodtest wordt gebruikt om onderscheid te maken tussen bacteriën die glucose via verschillende routes produceren en fermenteren. De test is gebaseerd op het vermogen van de bacteriën om zure eindproducten te produceren en te accumuleren tijdens de glucosefermentatie.

Escherichia coli (E. coli)

- Het is methylrood-positief omdat het glucose fermenteert via de gemengde zuurfermentatieroute, waardoor een mengsel van zure eindproducten ontstaat, waaronder melkzuur, mierenzuur, azijnzuur en barnsteenzuur.

- De ophoping van deze zuren verlaagt de pH van het kweekmedium, waardoor de methylroodindicator rood kleurt.

Enterobacter aerogenes (E. aerogenes) :

- Het is methylrood-negatief omdat het glucose vrijwel uitsluitend fermenteert via de butaandiolfermentatieroute, waarbij 2,3-butaandiol als het belangrijkste eindproduct ontstaat.

- Butaandiol is een neutraal product dat de pH van het kweekmedium niet significant verlaagt, wat resulteert in een negatieve methylroodtest.

Daarom kan het verschil in methylroodtestresultaten tussen E. coli en E. aerogenes worden toegeschreven aan de verschillende metabolische routes die ze gebruiken tijdens glucosefermentatie.