Het wassen van de microtiterplaatputjes na elke stap in verschillende biochemische en moleculair biologische testen zoals ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), DNA/RNA-isolatie, PCR en Western Blotting is een essentieel onderdeel van het experimentele protocol. Het doel van de wasstappen is het verwijderen van resterende reagentia, reactiecomponenten of eventuele verontreinigingen die de daaropvolgende stappen kunnen verstoren of de nauwkeurigheid en specificiteit van de test kunnen beïnvloeden.

Hier zijn een paar redenen waarom wasstappen noodzakelijk zijn:

Verwijdering van ongebonden stoffen: Wasstappen na het toevoegen van reagentia of antilichamen helpen bij het verwijderen van alle ongebonden stoffen, zoals overtollige antilichamen, niet-specifieke bindende moleculen of reactiecomponenten die niet worden opgevangen of gebonden aan de vaste fase. Dit zorgt ervoor dat het detectiesignaal specifiek is en vrij van achtergrondinterferentie.

Kruisbesmetting minimaliseren: Wasstappen verminderen effectief het risico op kruisbesmetting tussen monsters. Dit is vooral belangrijk wanneer meerdere monsters tegelijkertijd worden verwerkt, omdat hierdoor de overdracht van reactiecomponenten of verontreinigingen van de ene put naar de andere wordt voorkomen. Wassen helpt de integriteit en nauwkeurigheid van individuele monsterresultaten te behouden.

Efficiënte verwijdering van storende stoffen: Wassen is nodig om stoffen te verwijderen die de volgende stappen kunnen verstoren. In een ELISA-test helpt wassen bijvoorbeeld bij het elimineren van ongebonden conjugaat-antilichaamcomplexen, waardoor de achtergrondkleurontwikkeling wordt verminderd en de specificiteit van de colorimetrische reactie wordt verbeterd. Bij PCR verwijdert het wassen nucleotiden, primers en polymerasen uit eerdere amplificatiecycli, waardoor het risico op carryover-contaminatie wordt geminimaliseerd en nauwkeurige amplificatie in de volgende cyclus wordt gegarandeerd.

Standaardisatie en reproduceerbaarheid: Door gestandaardiseerde wasprocedures te volgen, zorgen onderzoekers ervoor dat de omstandigheden consistent zijn tussen experimenten en tussen verschillende laboratoria. Deze consistentie is van cruciaal belang voor het verkrijgen van betrouwbare en reproduceerbare resultaten.

De wasprocedure kan het gebruik van een meerkanaalspipet of een geautomatiseerde plaatwasmachine met zich meebrengen om de wasbuffer af te geven en op te zuigen. De wasbuffer is doorgaans een gebufferde zoutoplossing die lijkt op de samenstelling van de oorspronkelijke buffer die in de test werd gebruikt, maar die geen reactiecomponenten bevat.

Voldoende wassen zonder te veel wassen is cruciaal. Overmatig wassen kan resulteren in het verlies van essentiële componenten die aan de vaste fase zijn gebonden en kan de gevoeligheid van de test beïnvloeden. Daarom zijn wasprotocollen zorgvuldig ontworpen om een ​​optimale verwijdering van ongewenste stoffen te bereiken, terwijl de integriteit van de geïmmobiliseerde moleculen of analyten van belang behouden blijft.